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(Casein Kinase-1 substrate) ;RRKDLHDDEEDEAMSITA
基本信息中文名称酪蛋白激酶 1 底物精 - 精 - 赖 - 天冬 - 亮 - 组 - 天冬 - 天冬 - 谷 - 谷 - 天冬 - 谷 - 丙 - 甲硫 - 丝 - 异亮 - 苏 - 丙三字母序列Arg-Arg-Lys-Asp-Leu-His-Asp-Asp-Glu-Glu-Asp-Glu-Ala-Met-Ser-Ile-Thr-Ala单字母序列RRKDLHDDEEDEAMSITA分子式C85H139N27O35S分子量2131.26结构特征十八肽线性多肽无 N 端乙酰化、C 端酰胺化修饰无 D 型氨基酸不含半胱氨酸残基无巯基与二硫键无荧光、生物素等标记基团。氨基酸依次为 Arg、Arg、Lys、Asp、Leu、His、Asp、Asp、Glu、Glu、Asp、Glu、Ala、Met、Ser、Ile、Thr、Ala。磷酸化位点第 15 位 Ser是 CK1Casein Kinase 1酪蛋白激酶 1识别催化的丝氨酸残基Ser 侧链羟基接受 ATP 的 γ- 磷酸基团。序列中含有 Met甲硫氨酸甲硫氨酸的硫原子容易被氧化这是该肽区别于前面几条激酶底物肽的重要特点。结构式基本性质经典 CK1 体外多肽底物来源于天然蛋白识别区段。序列同时含有碱性残基 Arg、Lys还有大量酸性 Asp、Glu 残基属于两性多肽水溶性良好易溶于纯水、中性缓冲盐溶液难溶于纯有机溶剂。 不含 Cys但含有 MetMet 侧链硫醚基团对氧化敏感在暴露氧气、过氧化氢或者反复冻融条件下容易氧化生成甲硫氨酸亚砜氧化产物会降低底物被 CK1 识别的能力。固体粉末有吸湿性水溶液可被肽酶缓慢水解高温、碱性环境会加速肽键断裂。理论等电点偏酸性。作用机理CK1 家族是保守的丝氨酸 / 苏氨酸蛋白激酶特点是优先识别磷酸化残基或者酸性氨基酸位于磷酸化位点 N 端上游这和 CK2偏好位点下游酸性残基是很重要的区分点。 RRKDLHDDEEDEAMSITA 中Ser15 上游富集大量酸性 Asp/Glu 残基形成 CK1 偏好的识别环境。CK1 催化 ATP 的磷酸基团转移至 15 位 Ser 的羟基上生成磷酸化多肽。磷酸化之后多肽负电荷进一步增加。可采用 ³²P 同位素掺入、HPLC、毛细管电泳、质谱、磷酸特异性抗体等方法来定量磷酸化产物。应用领域科研工具肽仅限体外生化酶活实验不可用于人体给药或临床诊断。CK1 体外酶活测定重组酪蛋白激酶 1CK1α、CK1δ、CK1ε 亚型活性定量是文献广泛使用的标准底物。CK1 抑制剂高通量筛选用于小分子化合物筛选通过检测磷酸产物减少评估化合物对 CK1 的抑制活性计算 IC50、Ki。酶动力学参数测定测定 Km、Vmax、kcat 等动力学常数研究 CK1 不同亚型的底物识别偏好。激酶选择性验证与 CK2、PKA、PKG 等激酶底物平行对照评估抑制剂对 CK1 的选择性区分 CK1/CK2 活性。质谱方法学开发作为标准底物建立磷酸化多肽 LC-MS/MS 检测体系。药物研发CK1 家族参与 Wnt 通路、昼夜节律调控、细胞凋亡、DNA 损伤应答CK1δ/ε 是肿瘤、神经退行性疾病、炎症的热门靶点。 该多肽本身不是药物仅作为生化筛选工具用于体外高通量筛选 CK1 小分子抑制剂。目前多个 CK1 抑制剂处于临床前研究阶段部分候选分子进入早期临床评估。多肽极性高细胞膜穿透差在体内极易被肽酶水解不适合直接开发为治疗药物。研究进展RRKDLHDDEEDEAMSITA 是经典 CK1 底物截取自天然蛋白的 CK1 识别区域。构效关系研究证实Ser 上游连续酸性残基是 CK1 识别的关键上游酸性残基删减或者突变会显著降低催化效率。该底物经常用来对比 CK1 各个亚型CK1α,δ,ε之间底物偏好差异也常和 CK2 底物 RRREETEEE 成对使用用来区分 CK1 和 CK2 激酶活性。由于含有 Met氧化是该肽实验中常见的坑很多文献会提示实验体系中添加 DTT 或者抗坏血酸抑制 Met 氧化。储存规范粉末-20℃密封干燥避光保存推荐除氧封装减少甲硫氨酸氧化。尽量减少反复开盖防止吸潮。溶液现配现用中性缓冲液配制分装成单次使用小份-20℃冻存严禁多次冻融。可按需添加低浓度 DTT / 抗坏血酸抑制 Met 氧化避免室温久放避开强碱环境。
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